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甘油檢測試劑盒的樣本處理方法

更新時間:2022-11-09   點擊次數:513次

 甘油檢測試劑盒的樣本處理方法


甘油是甘油三酯的水解產物。與游離脂肪酸一樣,甘油含量是甘油三酯水解反應的可靠檢測指標,但檢測更加方便。本試劑盒采用優化步驟,能夠檢測實體組織、細胞中的甘油含量,線性范圍為10-1200µmol/L。原理:在 ATP 存在下甘油被甘油激酶磷酸化為 3-磷酸甘油,再被甘油磷酸氧化酶氧化產生過氧化氫;在過氧化物酶作用下生色底物轉化為苯醌亞胺,其光密度值與甘油濃度成正比。適用范圍:測定實體組織、細胞中的甘油濃度。


組成 (105 次微板測定或 30 次 1 ml 比色杯測定):

(1) 裂解液 50 ml

(2) R1 試劑 16 ml

(3) R2 試劑 4 ml

(4) 4 mmol/L 甘油標準品 1 ml4 oC

保存 6 個月有效

QQ圖片20221109112219.png

 


所需設備:酶標儀、生化分析儀或 721、722 型可見光分光光度計。最佳工作波長 550nm,如無此波長建議優先選用 570nm、次選 530、490nm。

一 組織細胞裂解細胞(包括分化的脂肪細胞)裂解:消化、離心收集細胞。或直接在培養皿內裂解。通常6孔板單孔約2x106個細胞,75cm2瓶約1x107細胞。按比例每 1~2 x 106細胞加 0.1ml 裂解液,震蕩或渦旋裂解后,靜置 10 分鐘。

動物組織裂解:切記要預先將新鮮組織剪切稱重后再進行保存。組織凍存后再進行解凍、剪切、稱重可能會產生嚴重的測量誤差。離心管精確稱重,加入組織塊后再稱重,二者相減(即減量稱重法)計算組織重量(約 100mg)。

強烈建議按比例每 1mg 組織加10µl裂解液以減少樣品間蛋白和脂質含量變異而產生的誤差。(注意;裂解液用量在 1ml 或更多可保證有效的裂解與脂質提取)。用電動高速勻漿器或手動玻璃勻漿器破碎組織。(不推薦超聲方法,因其不能和均勻破碎。應根據預實驗調整初始的組織細胞加入量),而后,靜置 10 分鐘。


 甘油檢測試劑盒的樣本處理方法

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