植物類黃酮檢測試劑盒的技術(shù)參數(shù)
更新時間:2023-12-01 點(diǎn)擊次數(shù):362次植物類黃酮檢測試劑盒的技術(shù)參數(shù)
一、測定意義:
類黃酮是一類多苯化合物,屬于植物次生代謝物,對人
體具有消炎,抗菌,降血脂,清除體內(nèi)羥自由基,預(yù)防癌癥
等作用
二、測定原理:
在堿性亞硝酸鹽溶液中,類黃酮與鋁離子形成在502nm處
有特征吸收峰的紅色絡(luò)合物,測定樣品提取液在502nm處的吸
光值,即可計(jì)算樣品類黃酮含量。
三、儀器設(shè)備(自備):
烘箱、粉碎儀、研缽、篩子、60%乙醇、離心機(jī)、可見分
光光度計(jì)、60℃震蕩恒溫箱。
四、試劑組成:(50T/48 樣)
提取液:60%乙醇,自備。
試劑一:液體2mL×1 瓶,4℃保存。
試劑二:液體2mL×1 瓶,4℃保存。
試劑三:液體25mL×1 瓶,4℃保存。
試劑四:標(biāo)準(zhǔn)品粉劑 1mg×1支,使用時加入1mL 60%乙醇,
于60℃恒溫振蕩10分鐘使其溶解,配成mg/mL
標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液。
五、操作步驟:
1、類黃酮提取:
干樣:將樣本烘干至恒重,粉碎,過40目篩之后,稱取約0.02g,
加入2mL 提取液,60℃震蕩提取2小時,10000g,室溫
離心10min,取上清,待測。
鮮樣:將植物用生理鹽水清洗后,將表面水分擦干,剪碎,
液氮研磨成粉狀,稱取約0.05g,加入2mL提取液(含
量低可酌情減少提取液量),60℃震蕩提取2小時,
10000g,室溫離心10min,取上清,待測。
2、操作表:
注:正式實(shí)驗(yàn)前最好取1-2例相對差異較大的樣本進(jìn)行預(yù)試,
ΔA測定大于1時需要稀釋樣本上清后再測定。
六、計(jì)算公式:
制作標(biāo)準(zhǔn)曲線:將1mg/mL標(biāo)準(zhǔn)液用60%乙醇稀釋成
0.1mg/mL、0.08mg/mL、0.06mg/mL、0.04mg/mL、
0.02mg/mL幾個濃度按操作表標(biāo)準(zhǔn)管及空白管進(jìn)行實(shí)驗(yàn),
得出OD值后繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,如下:
則計(jì)算公式為:
類黃酮含量(mg/g)=(ΔA測定-0.0141)÷9.0771×提取液總體
積(2mL)÷樣本質(zhì)量(g)
七、技術(shù)參數(shù):
1、試劑盒檢出限為1μg/mL,如果ΔA測定值大于1,則需將樣本
上清液作適當(dāng)稀釋以后測定;
2、本試劑盒回收率可達(dá)95%-100%,穩(wěn)定性好,準(zhǔn)確性高;
3、標(biāo)準(zhǔn)品配置時溫度低會使其溶解緩慢,60℃振蕩溶解時需
密封好,防止液體溢出造成損失;
4、假如沒有分光光度計(jì),也可用酶標(biāo)儀進(jìn)行測定,波長不變
(或者在±10nm波動范圍內(nèi)選擇)。
植物類黃酮檢測試劑盒的技術(shù)參數(shù)