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信帆生物:免疫組化問題及解決辦法

更新時間:2016-05-12   點擊次數:1604次

1、染色過強

原因

解決辦法

抗體的濃度過高或抗體孵育時間過長降低抗體滴度(一般指濃縮性抗體)抗體孵育時間:室溫1小時或4℃過夜
孵育溫度過高,孵育溫度超過37℃一般室溫20-28℃
DAB顯色時間過長或DAB濃度過高顯色時間不能超過5-10分鐘,以顯微鏡下觀察為準

2、非特異性背景染色

原因

解決辦法

操作過程中沖洗不充分每步沖洗3×5
組織中含過氧化物酶未阻斷可再配置新鮮3%H2O2封閉,孵育時間延長
組織中含內源性生物素正常非免疫動物血清再封閉
血清蛋白封閉不充分延長血清蛋白封閉時間

3、染色弱

原因

解決辦法

抗體濃度過低,孵育時間過短提高抗體濃度,孵育時間不能少于60分鐘
試劑超過有效使用期及時更換試劑
操作中,滴加試劑時緩沖液未瀝干,致使試劑稀釋每步滴加試劑前瀝干切片中多余的緩沖液(但防止切片干燥)
室溫太低,低于15℃若室溫低于15度,要改放在37℃孵育箱孵育30-60分鐘(或4℃冰箱過夜)
蛋白封閉過度封閉時間不要超過10分鐘

4、染色陰性

原因

解決辦法

操作步驟錯誤重新試驗,設立陽性對照
組織中無抗原設立陽性對照片,以驗證實驗結果
一抗與二抗種屬連接錯誤仔細確定一抗與二抗種屬無誤
 

 

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