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信帆生物:免疫組化染色之DAKO EPOS法

更新時(shí)間:2016-05-12   點(diǎn)擊次數(shù):1435次

自Nakane(1966)建立了免疫酶標(biāo)記技術(shù)以來,這門技術(shù)得到了迅速的發(fā)展。DAKO EPOS的多聚螯合物免疫組化一步染色法,是一種即用型快速而有效的方法,具有更為簡便、更為敏感和高特異性的特點(diǎn)。

1.、材料和方法

(1)材料

均為本院日?;顧z組織共32例,其中肉瘤5例,淋巴瘤7例,上皮癌12例,膠質(zhì)瘤8例。用10%甲醛固定,常規(guī)脫水、包埋、切片。

(2 )試劑

EPOS-Vimentin、LCA、Cytokeratin、S-100和一抗Vimentin、LCA、Cytokeratin、S-100以及LSABKit(K681)均由DAKO公司生物試劑,廣州基因公司提供。

(3 )方法

LSAB法(略)。

DAKOEPOS法:切片常規(guī)脫蠟至水;3%過氧化氫室溫孵育5min;pbs緩沖液洗3次,每次5min;用DAKO EPOS/Horseradish Peroxidase(HRP)室溫孵育30~60min;PBS緩沖液洗3次,每次5min;DAB顯色,水洗;蘇木素復(fù)染、脫水、封片。

2、結(jié)果

DAKO EPOS一步法染色結(jié)果陽性物質(zhì)呈棕黃色,LCA定位于細(xì)胞膜,Vimentin、Cytokeratin、及S?100定位于細(xì)胞漿,蘇木素復(fù)染細(xì)胞核呈藍(lán)色,背景清晰,非特異性染色少,EPOS法與LSAB法比較,不但簡化了操作步驟,而且大大縮短了染色時(shí)間,具有更佳的對(duì)比度,結(jié)果比較如表1所示。

3、討論

DAKO EPOS一步染色法是將特異性抗體和酶標(biāo)分子結(jié)合于柔韌的多聚螯合物,使特異性抗體和檢測系統(tǒng)結(jié)合為一種試劑,具有高靈敏性、高特異性、省時(shí)、減少處理步驟、重復(fù)性好、即用、低背景染色的優(yōu)點(diǎn)。

(1)省時(shí)

傳統(tǒng)的PAP、ABC或LSAB法整個(gè)染色程序時(shí)間在2~3h之間,而DAKOEPOS一步法染色時(shí)間只需40min,大大地節(jié)約了時(shí)間,而且省去了很多繁瑣的步驟。值得一提的是,利用DAKOEPOS一步法加上微波快速處理,整個(gè)染色制片過程僅用10min即可,特別適合于冰凍切片急診手術(shù)的鑒別診斷,只需Cytokeratin、LCA、S-100、Vimentin幾種抗體,就可以區(qū)分該腫瘤是來源于上皮、淋巴、神經(jīng)或間葉組織的腫瘤,為手術(shù)的進(jìn)一步進(jìn)行和及時(shí)用藥治療提供了更為可靠的依據(jù)。

(2 )低背景

從表1中可以發(fā)現(xiàn),DAKO EPOS法染色的背景比LSAB法要低,其原因是前者只要一步即可,HRP直接結(jié)合在特異性的抗體上,無需引入橋抗,后者則需要三步,必需借助橋抗的連接且HRP是結(jié)合在非特異性的復(fù)合物上,染色步驟增多,導(dǎo)致背景染色加深。

(3 )高敏感性和高特異性

不同種系的IgG分子結(jié)構(gòu)是相似的,因此抗一種動(dòng)物的IgG可能與另一種動(dòng)物的IgG會(huì)引起交叉反應(yīng)。而DAKO EPOS法將一抗和檢測系統(tǒng)結(jié)合為一種試劑,避免了動(dòng)物間IgG的交叉反應(yīng),從而提高了敏感性和特異性。

此外,DAKO EPOS試劑是即用型產(chǎn)品,無需進(jìn)行稀釋,且以使用方便的滴瓶提供,減少了抗體的污染,更適合在實(shí)際操作中的應(yīng)用。

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