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細胞培養基

更新時間:2016-11-28   點擊次數:2463次

    經典的培養基有很多種,其中 DMEM、 RPMI 1640、 MEM 、 DMEM/F12 都是應用廣泛的培養基。其他 如 M199 、 IMDM 、 L15培養基等也用于某些細胞的培養。其具體的特征及應用如下:

1、BME細胞培養基

    基礎Eagle培養基(Basal Medium Eagle),1955年Eagle設計,BSS+12種氨基酸+谷氨酰胺+8種維生素。簡單、便于添加,適于各種傳代細胞系和特殊研究用,在此基礎上改良的細胞培養基品種有MEM、DMEM、IMDM等。

2、MEM細胞培養基

    又稱*Eagle培養基(Minimal Essential Medium),1959年在Eagle's基礎培養基(BME)上修改而來,刪去賴氨酸、生物素,氨基酸濃度增加,適合多種細胞單層生長,有可高壓滅菌品種,是一種基本、試用范圍廣的培養基,但因其營養成分所限,針對生物試劑之特定細胞培養與表達時,并不一定是使用效果佳或者經濟的培養基。

3、DMEM

   DMEM是由Dulbecco改良的Eagle培養基,起初是為小鼠成纖維細胞設計的。DMEM的氨基酸濃度是MEM的兩倍,維生素濃度是MEM的4倍,采用雙倍的HCO3-和CO2濃度起到更好的緩沖作用。開始的配方中葡萄糖含量為1000 mg/L,后來為了某些細胞的生長需要,將葡萄糖含量又調整為4500 mg/L,這就是大家常說的低糖和高糖了。

4、IMDM

    Guilber 和Iscove將Dulbecco' Medium 改良為 Iscove's Medium,用于培養紅細胞和巨噬細胞前體。此種培養液含有硒、額外的氨基酸和維生素、丙酮酸鈉和HEPES。并用硝酸鉀取代了硝酸鐵。IMDM還能夠促進小鼠B淋巴細胞,LPS刺激的B細胞,骨髓造血細胞,T細胞和淋巴瘤細胞的生長。IMDM為營養非常豐富的培養液,因此可以用于高密度細胞的快速增殖培養。

5、RPMI-1640

   Moore等人于1967年在Roswell Park Memorial Institute研制,針對淋巴細胞培養設計,含BSS+21種氨基酸+維生素11種等。現也用于懸浮細胞培養,如哺乳動物、特殊造血細胞、正常或惡性增生的白細胞,雜交瘤細胞的培養,其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴細胞、T細胞淋巴瘤細胞以及HCT-15上皮細胞等均可參考使用。

6、HamF10

   1963年Ham設計,含微量元素,可在血清含量低時用,適用于克隆化培養。F10適用于倉鼠、人二倍體細胞,特適于羊水細胞培養。

7、DMEM/F12

   Ham's F12是為在低血清濃度下克隆CHO細胞而設計的,現在也廣泛應用于克隆形成率的分析及原代培養。F12還可以與DMEM等體積混合使用,得到一種高濃度與成分多樣化相結合的產物,這種培養基已應用于許多原代培養及更難養的細胞系的培養。由于營養成分豐富,且可以使用較少血清,故也常作為無血清培養基的基礎培養基。

至于選擇何種培養基并沒有一定的標準,有幾點建議可供參考:

(1)建立某種細胞株所用的培養基應該是培養這種細胞的培養基。可以查閱參考文獻,或在購買細胞株時咨詢。也可以在一些生物公司的上搜索,如Invitrogen上有一個Cell Line Database的工具,選擇你感興趣的細胞類型,它就會彈出的培養基、血清和轉染試劑等,有時還有優化好的轉染步驟,很方便。

(2) 其它實驗室慣用的培養基不妨一試,許多培養基可以適合多種細胞。

(3) 根據細胞株的特點、實驗的需要來選擇培養基。如小鼠細胞株多選RPMI1640 。

(4) 用多種培養基培養目的細胞,觀察其生長狀態,可以用生長曲線、集落形成率等指標判斷,根據實驗結果選擇佳培養基,這是客觀的方法,但比較繁瑣。

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