蛋白快速銀染試劑盒操作步驟
更新時間:2019-01-03 點擊次數:1299次蛋白快速銀染試劑盒操作步驟
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自備材料:
1、水平搖床或側擺搖床
2、去離子水(超純)
3、乙醇、冰乙酸
1、準備工作:以下操作以 8.5×5.5cm、厚度為 1.0mm 的凝膠為例,以凝膠全部浸沒到溶
液為準,一般用量是 25ml,對于凝膠體積的,各溶液的使用量需按凝膠體積比例
放大。整個銀染過程應在搖床上進行,搖床轉速控制在 60~70rpm。提前配制固定液,
即按無水乙醇:冰乙酸:去離子水=5:1:4 的比例配制。提前配制洗滌液,即按無水乙醇:去
離子水=1:4 的比例配制。
2、水洗:電泳結束后,取凝膠放入去離子水中清洗 2 次,每次 5min。
3、固定:取凝膠放入 50~100ml 固定液中,在搖床上室溫搖動 15~20min,重復固定步
驟 1 次
4、洗脫:取凝膠放入洗滌液中清洗 2 次,每次 5min。
5、水洗:去離子水清洗凝膠 2 次,每次 5min。
6、增敏:配制銀染增敏工作液,即取 Silver Stain Sensitizer(500×)0.1ml 加入到 50ml
去離子水中,混勻,即1×Silver Stain Sensitizer,一般應2h內用完。室溫下用1×Silver Stain
Sensitizer 孵育凝膠 2min,立即用去離子水清洗凝膠 2 次,每次 1min。
7、銀染:配制銀染工作液,即取 Silver Stain(100×)0.5ml 加入到 50ml 去離子水中,混勻,
即得 1×Silver Stain,一般應 2h 內用完。取凝膠入 1×Silver Stain,在搖床上室溫搖動 10~
20min。
8、水洗:棄液,在搖床上用去離子水清洗凝膠 2 次,每次 30s,搖動速度在 60~70rpm。
總的水洗時間應控制在 1.5min 內。
9、顯影:配制銀染顯影工作液,即取 Silver Stain Developer(5×)10ml 加入到 40ml 去離
子水中,混勻,即 1×Silver Stain Developer,一般應 30min 內用完。清洗凝膠后,立即
置于 1×Silver Stain Developer 中,室溫孵育 2~10min,直至蛋白條帶清晰可見。一般
顯色 30s 后就會出現棕色沉淀,繼續顯影 2~3min,亦可延長至 5min 以上,如果顯影效
果不佳,可重新更換 1×Silver Stain Developer 繼續顯影。
10、迅速用去離子水清洗凝膠以避免顯影過度,背景染色。立即加入銀染終止液,搖床上
搖動 10min,以終止顯色反應。(配制銀染終止液,即取 Silver Stain Stop Buffer(10×)10ml
加入到 90ml 去離子水中,混勻,即 1×Silver Stain Stop Buffer,一般應 24h 內用完。)
11、保存:棄終止液,加入去離子水 50ml,搖床上搖動 2~5min,棄液。短期保存于新鮮
去離子水,保存可以制備干膠。
蛋白快速銀染試劑盒操作步驟