MTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒的使用方法
更新時間:2019-05-07 點擊次數:1407次 MTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的檢測。MTT可以被線粒體內的一些脫氫酶還原生成結晶狀的深紫色產物formazan。在特定溶劑存在的情況下,可以被*溶解。然后通過酶標儀可以測定570nm波長附近的吸光度。細胞增殖越多越快,則吸光度越高;細胞毒性越大,則吸光度越低。
噻唑蘭(Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide, MTT),也稱作溴化噻唑藍四氮唑,是一種黃色染料,已經普遍替代傳統的臺盼藍染色法或者放射性同位素插入法,用來檢測細胞的活力,細胞增殖以及細胞毒性分析。檢測原理在于:MTT是一種可接受氫離子的化合物染料,帶正電荷,具有細胞膜滲透性。活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能夠將外源進入的MTT還原成為水不溶性的深藍色MTT-甲臜結晶,而死細胞不具有此功能。甲臜結晶是不能穿透細胞膜,因此沉積在處于增殖且未受損傷的細胞內。甲臜結晶可用DMSO或者酸化的異丙醇溶解出來,酶標儀下測定570 nm的吸光度反映甲臜的生成量。而甲臜的生成量與活細胞數目成正比,用以評估細胞存活狀況。
保存條件:
4℃或-20℃保存,MTT需避光保存,一年有效;MTT配制成溶液后需-20℃避光保存;Formazan溶解液也可以室溫保存。
注意事項:
1、由于使用96孔板進行檢測,如果細胞培養時間較長,一定要注意蒸發的問題。一方面,由于96孔板周圍一圈容易蒸發,可以采取棄用周圍一圈的辦法,改加PBS,水或培養液;另一方面,可以把96孔板置于靠近培養箱內水源的地方,以緩解蒸發。
2、 MTT溶劑在低溫情況下會凝固,使用前請室溫放置或20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。
3、 MTT配制成溶液后為黃色,需避光保存,長時間光照會導致失效。當顏色變為灰綠色時,請勿使用。MTT溶液在4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固,可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。
4、 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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