信帆生物銷售黃嘌呤氧化酶,歡迎訂購!
更新時(shí)間:2019-12-02 點(diǎn)擊次數(shù):1002次信帆生物專業(yè)提供黃嘌呤氧化酶,產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定,*,確保銷售給客戶的產(chǎn)品是能夠符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),適合客戶要求的產(chǎn)品。本產(chǎn)品*,歡迎新老客戶前來咨詢訂購.
測(cè)定意義:
XOD(EC 1.17.3.2)催化黃嘌呤氧化生成尿酸和超氧陰離子,是活性氧主要來源之一;同時(shí)也是核苷酸代謝的關(guān)鍵酶之一。XOD主要分布于哺乳動(dòng)物的心,肺,肝臟等組織中,當(dāng)肝功能受損時(shí),XOD大量釋放到血清中,對(duì)肝損害的診斷具有特異性的意義。
測(cè)定原理:
XOD催化黃嘌呤產(chǎn)生尿酸,尿酸在290nm下有特征吸收峰。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液:100mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:30mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×2瓶,4℃保存。
粗酶液提取:
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備
收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每200萬細(xì)菌或細(xì)胞加入400μL提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率20%,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
稱取約0.1g組織,加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿;8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
2、血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。
操作步驟:
- 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至2940nm,蒸餾水調(diào)零。
2、XOD檢測(cè)工作液的配制:用時(shí)在每瓶試劑二中加入15mL試劑一,充分混勻,待用。
3、測(cè)定前將XOD檢測(cè)工作液在37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)水浴10min以上。
4、在EP管中加入10μL樣本和250μL工作液,立即混勻并計(jì)時(shí),立即取200µL轉(zhuǎn)移至微量石英比色皿或96孔板中,記錄290nm下初始吸光值A1和1min后的吸光值A2。計(jì)算ΔA=A2-A1。
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