ELISA實驗中很常見的一些小問題,如何處理?
更新時間:2020-07-22 點擊次數:2419次ELISA實驗中很常見的一些小問題,如何處理?
我們在做ELISA實驗的時候,經常遇到一些小問題,比如樣本如何處理,用什么軟件處理ELISA的結果,信帆生物為您支招!
首先我們來了解一下ELISA樣本處理的方法:
血清樣本如何處理?
全血標本于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000×g離心20分鐘。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
血漿樣本如何處理?
建議選擇EDTA或者檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,于1000×g離心15分鐘,仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
細胞上清液樣本如何處理?
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(1000×g)。仔細收集上清
細胞裂解液樣本如何處理?
檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或者超聲破碎,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心10分鐘左右(5000×g)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
組織樣本如何處理?
用預冷的PSB (0.01M,pH=7.4)沖洗組織,以去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣本對應9mL的PBS,具體體積可根據實驗需要適當調整,并做好記錄。在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復凍融。*后將勻漿液于5000×g 離心5~10分鐘,取上清檢測
接下來我們來看看檢測數據用什么軟件分析比較好呢?
ELISA標準曲線擬合可以應用Curve Expert軟件進行數據分析。它使用非常方便,可以生成漂亮的曲線應用到論文之中。軟件可以在下載中心進行下載。
ELISA實驗中很常見的一些小問題,如何處理?