介紹酶抑制分光光度法
更新時間：2020-11-14 點擊次數：1130次介紹酶抑制分光光度法
一、有機磷農-藥和氨基甲酸酯農-藥的作用機理
有機磷和氨基甲酸酯類農-藥能抑制昆蟲神經中樞和周圍神經系統中乙酰膽堿酶的活性，造成神經傳導介質乙酰膽堿的積累，影響正常傳導，使昆蟲中毒致死。如果有有機磷農-藥存在，有機磷農-藥就與膽堿酯梅結合，膽堿酯酶就不能分解乙酰膽堿為乙酸和膽堿，造成乙酰膽堿在神經肌接頭和體內其它部位的過量積聚，引起一系列神經中毒癥狀。
二、乙酰膽堿酯酶抑制法（酶法）的作用原理
從生物化學的角度看，有機磷農-藥和氨基甲酸酯農-藥與乙酰膽堿是競爭性作用于膽堿酯酶的，即膽堿酯酶可以與乙酰膽堿結合，催化乙酰膽堿生成乙酰和膽堿，另一方面，如果膽堿酯酶與有機磷農-藥結合，就阻斷了反應的進行。根據這個原理，就可以利用膽堿酯酶的催化反應的抑制法，設計一種通過顏色變化的直觀的檢測方法，來快速檢測有機磷農-藥和氨基甲酸酯農-藥的殘留情況。因此，生物化學法（酶法）就是利用某種酶受影響的程度來反映農產品中農-藥殘留量。
三、速測儀法（酶抑制分光光度法）方法原理
乙酰膽堿酯酶水解后，水解產物可與顯色劑反應產生顏色，有機磷和氨基甲酸酯類農-藥可以抑制乙酰膽堿酯酶的活性，使這種酶不能被水解，從而無顯色反應。在溶液中加入乙酰膽堿酯酶和顯色劑，用此判斷有機磷和氨基甲酸酯類農-藥殘留是否存在。在溶液中反應后，用分光光度計測定吸光值隨時間的變化，計算出抑制率，以此判斷蔬菜中含有機磷和氨基甲酸酯類農-藥殘留的情況。
四、速測儀法的優缺點：
優點：在于簡單方便，快捷、成本低廉。整個檢測過程只需30分鐘左右，它可以作為傳統儀器分析方法的有益補充，針對市場、農場蔬菜農-藥殘留量進行快速篩選監測，保證上市蔬菜食用的相對安全性。
缺點：酶試劑易失活，導致反應不穩定，檢測結果誤差，重復性不好，實際應用中的確認率大約為60%~70%左右；存在檢測盲區，只能檢測有機磷和氨基甲酸酯兩類農-藥，不能檢測有機氯類、菊酯和其它類別的劇毒農-藥；不適合檢測蔥蒜類、香菜、韭菜、番茄、胡蘿卜、茭白、蘑菇、花椒等14種容易出現假陽性的農產品；需要對檢測人員進行專門培訓，否則將會對出現的問題無法正確處理或判斷，得出錯誤的結果。
由農-藥殘留快速檢測儀生化檢測法開發的速測卡法（酶抑制顯色紙片法）和速測儀法（酶抑制分光光度法），前者在80年代在省級部門小范圍使用過，后被后者取代。目前我省廣泛使用農-藥殘留檢測方法主要有兩大類—色譜檢測法和速測儀法。色譜檢測法用作農殘定量分析，可為農-藥殘留執-法提供依據，主要分布在省級相關部門，部分地州也具有一定的檢測能力。速測儀法只能作農殘定性分析，但它具有短時間能夠檢測大量樣本、檢測成本低，對于檢測人員技術水平要求低，易于在基層推廣等特點，是目前我國控制高毒農-藥殘留的一種有效方法，也是目前國內和我省應用的農-藥殘留快速檢測方法。廣泛用于蔬菜、水果生物試劑基地和批發市場等，主要用來防止有機磷和氨基甲酸酯類農-藥殘留嚴重超標的蔬菜和水果流入市場。
