植物組織蔗糖(sucrose)含量檢測原理!
更新時間:2021-11-22 點擊次數:1906次植物組織蔗糖(sucrose)含量檢測原理!
蔗糖是植物光合作用的主要產物,也是糖分運輸和儲藏的主要形式。因此,測定蔗糖含量對于植物糖代謝具有重要意義。此外,蔗糖含量是飲料﹑蜂蜜、果脯﹑糖果和乳制品等產品質量控制的重要指標之一。
測定原理:
酸性條件下蔗糖水解生成葡萄糖和果糖,果糖進一步與間苯二酚反應,生成有色物質,在480nm下有特征吸收峰。
所需的儀器和用品:
可見分光光度計、水浴鍋、可調式移液器、1mL玻璃比色皿和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:液體 100ml×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體10mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:液體5ml×1瓶,4℃保存;
試劑三:液體 40ml×1瓶,4℃保存;
試劑四:液體 10ml×1瓶,4℃保存;
試劑五:粉劑0.5g×1瓶,常溫保存。
蔗糖提取:
稱取約0.1g樣本,常溫研碎,加入1mL提取液,適當研磨后快速轉移到離心管中,置于80℃水浴鍋中10min,振蕩3~5次,冷卻后,離心取上清,加入2mg試劑五,80℃脫色30min,再加入1mL提取液,離心后取上清液測定。
測定操作表(在1.5mL EP管中依次加入下列試劑):
試劑(μL) | 空白管 | 標準管 | 測定管 |
樣本 | 100 | ||
試劑一 | 100 | ||
蒸餾水 | 100 | ||
試劑二 | 50 | 50 | 50 |
混勻,100'C煮沸5min左右(蓋緊,防止水分散失)
試劑三 | 700 | 700 | 700 |
試劑四 | 200 | 200 | 200 |
混勻,80℃水浴內反應10min左右,冷卻后測定480nm處光吸收值,空白管、標準管和測定管分別記為A1、A2和A3。
蔗糖含量計算:
1、按照蛋白質含量計算
蔗糖含量(mg/mg prot )=1mg/mL ×(A3-A1)÷(A2-A1) ÷蛋白濃度mg/mL。
2、按照樣品質量計算
蔗糖含量(mg/g鮮重)=1mg/mL ×(A3-A1)÷(A2-A1) ÷樣品鮮重g/mL。
本產品僅供科研實驗用,不做其它用途!