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谷胺酰胺合成酶測試盒說明書下載

點擊次數:1149 發布時間:2016/3/15
提 供 商: 信帆生物 資料大?。?/td>
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谷胺酰胺合成酶Glutamine   synthetaseGS試劑盒說明書

測定意義

分光光度法 50 管/24 

GSEC 6.3.1.2主要存在于植物中,是生物體內氨同化的關鍵酶之一,催化銨離子和谷氨 成谷氨可以防過多的離子對物有毒,谷氨酰主要儲 存和運輸形式。

測定原理

GS  ATP  Mg2+存在下,催化銨離子和谷氨酸合成谷氨酰胺;谷氨酰胺進一步轉化為γ─ 谷氨酰基異羥肟酸,在酸性條件下與鐵形成紅色的絡合物;該絡合物在 540nm 處有zui大吸 收峰,可用分光光度計測定。

所需的儀器和用品

可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸 餾水。

試劑的組成和配制

提取液:30mL×1 瓶,4℃保存。 試劑一:10mL×1 瓶,-20℃保存。 試劑二:10mL×1 瓶,-20℃保存。

試劑×-20℃保存。用時瓶加入 5mL 蒸餾水充溶解備,用不的試劑仍

-20℃保。

試劑四:10mL×1 瓶,4℃保存。

樣本測定的準備

按照織質g:提液體積(mL) 15~10 的比(建稱取約 0.1g 組織,加入 1mL

,進冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min上清,冰上待。

測定步驟

1、 分光光度計預熱 30min 以上,調節波長至 540nm,蒸餾水調零。

2  EP 管中加入下列試劑:

試劑名稱(μL

測定管

對照管

試劑一

320

 

試劑二

 

320

試劑三

140

140

樣本

140

140

混勻,37℃(哺乳動物)或 25℃(其他物種)準確水浴 30min

試劑四

200

200

靜置 10mi5000g,離心 10min,取上液測定 540nm 吸光值 A。△A=A 測定管-A 對照管。每個測定管需設一個對照管。

 

GS 活力單位的計算

1)按樣本蛋白濃度計算:

單位的定義:每 mg 組織蛋白在每 mL 反應體系中每 min  使 540nm 下吸光值變化 0.01 定義 為一個酶活力單位。

GSU/mg prot)=ΔA×V 反總÷Cpr×V 樣)÷0.01÷T =19×ΔA÷Cpr

2)按樣本鮮重計算:

單位定義 組織 m反應系中每 min  使 540nm 下吸光值變化 0.01 定義一個 酶活力單位。

GSU/g  鮮重)=ΔA×V 反總÷(W× V ÷V 樣總)÷0.01÷T =19×ΔA÷W

V 反總:反應體系總體積,0.8mL; V 樣:加入樣本體積,0.14mL;V 樣總:加入提取液 體積,1 mLT:反應時間,30 min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g。

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