祝賀大連醫科大學付老師文章發表，并且榮獲中國碩士學位論文
更新時間：2015-09-22 點擊次數：1212次 熱烈祝賀大連醫科大學付老師文章見刊，并且榮獲中國碩士學位論文，文章名稱：《恥垢分枝桿菌動物模型的構建及其與宿主免疫系統的相互作用》，希望付老師以后能有更加的文章見刊。
文章中所用到的試劑盒是付老師在我們公司購買的（信帆生物科技有限公司，Shanghai Xinfan Bio techology Co.,Ltd）
小鼠白介素10(IL-10)elisa試劑盒
小鼠白介素6(IL-6)ELISA試劑盒
小鼠粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)Elisa試劑盒
小鼠干擾素-γ(IFN-γ)ELISA試劑盒
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文章主要講述了：結核病（Tuberclosis）是由結核分枝桿菌引起的一種嚴重的呼吸道傳染病。結核病引起的后果對社會來說是巨大的。現在*三分之一的人口（約20億人）已經感染了結核分枝桿菌，結核病占疾病的2.5%。盡管比起其他感染性疾病結核病的發病率有一個穩固的下降，但是除非有重大的研究結果出現，結核病持續較高死亡率的情況將持續到2020年。艾滋病和其合并形成了一個致死性的疾病組合，互相能加速發病的進程。這樣的情況說明，結核病的發病與否與宿主的免疫系統有著非常密切的，因此結核病也成為世界關心的健康問題。[1,2,3] 分枝桿菌屬包括大約100多種菌，其中包括能引起結核病的致病性分枝桿菌，如結核分枝桿菌；同樣還包括非致病性的分枝桿菌，如恥垢分枝桿菌。恥垢分枝桿菌是一種與結核分枝桿菌具有同源性、快速生長、少量接種對豚鼠、大鼠、小鼠無致病性的分枝桿菌[4,5]。其細胞壁表面的有效抗原成分，如脂阿拉伯甘露糖（LAM）、脂蛋白（LP）及全細胞溶解物（Whole Cell Lysate,WCL），是與宿主免疫系統互相作用的分子[8,9]，這些分子是安全、有效的免疫調節劑，能有效地促進免疫系統的Th1應答[9]。 在闡明結核病發病機制、研發疫苗等實驗研究中，動物實驗是zui有效和*的方法[13,17]。本實驗優化了構建恥垢分枝桿菌小鼠模型的方法，不但對小鼠的外部傷害減少的zui低程度，同時也更真實地模擬了人類感染結核分枝桿菌的方式，以此來探討高濃度（5×107CFU/day）恥垢分枝桿菌構建小鼠模型的可行性。 本實驗的目的： (1)本實驗利用高濃度（5×107CFU/day）的非致病性恥垢分枝桿菌構建小鼠模型，以微生物氣溶膠氣霧攻擊方式使小鼠肺部產生類結核狀病變，來探討利用此種方法、此種條件下，建模的可行性； (2)探討高濃度（5×107CFU/day）的非致病性恥垢分枝桿菌在持續感染的情況下使小鼠肺部產生病理損傷的原因； (3)探討恥垢分枝桿菌細胞壁表面成分脂阿拉伯甘露糖（LAM）對小鼠免疫系統的刺激和調節作用； (4)探討恥垢分枝桿菌全細胞溶解物（WCL）對小鼠免疫系統的刺激和調節作用。 本實驗的主要方法： (1)選擇近交系動物中對分枝桿菌zui敏感的的C57BL小鼠，周齡為4-8周的雄性小鼠； (2)利用加入0.05%的Tween80LB液體培養基培養野生型恥垢分枝桿菌M.Smegmatis mc2155菌株； (3)利用M.Smegmatis mc2155的生長曲線與OD589測定菌液的濃度； (4)提取野生型恥垢分枝桿菌M.Smegmatis mc2155細胞壁表面物質脂阿拉伯甘露糖（LAM）； (5) M.smegmatis mc2155WCL（Whole Cell Lysate，全細胞溶解物）的制備：菌體細胞與細胞裂解液37℃孵育10min，菌液進行超聲破碎，功率200W，破碎30s，間歇30s；破碎20-30個循環； (6)將實驗動物C57BL小鼠隨機分成5組：空白組，S組，LS組， WS1組，WS2組。各組動物分籠飼養，自由飲食飲水，飼養條件保持恒溫恒濕，并定期通風消毒。 (7)小鼠的處理：各組小鼠按如下方式制備感染物，利用微生物氣溶膠發生器制備感染物的氣溶膠懸液，以氣霧攻擊方式感染小鼠。S組：5×107CFU野生型M.smegmatis MC2155；LS組：30μg/day LAM，預處理兩天，第三天開始5×107CFU野生型M.smegmatis MC2155處理；WS1組：全細胞溶解物：野生型M.smegmatis MC2155=1：1混合物；WS2組：全細胞溶解物：野生型M.smegmatis MC2155=9：1混合物。 (8)分別在第7、14、21、28天，各組隨機選擇3只小鼠：眼球取小鼠外周血，分離血清；檢測血清中IFN-γ、IL-6、IL-10、GM-CSF四中細胞因子的水平；取肺部組織，一部分做病理切片觀察病理變化，另一部分用來檢測肺部組織中活菌的數量。 本實驗的結論： (1)用氣霧攻擊方式，以5×107CFU/day的濃度構建恥垢分枝桿菌C57BL小鼠模型是可行的； (2)高濃度（5×107CFU/day）的恥垢分枝桿菌持續感染而使小鼠產生肺部病理損傷的原因是Th1/Th2反應失衡； (3)恥垢分枝桿菌細胞壁成分LAM能激活Th1反應具有免疫調節作用； (4) WCL與少量活菌混合后的免疫調節作用強于單獨使用LAM，為研發新的疫苗奠定基礎。
