MTT實驗代測
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MTT實驗代測MTT全稱為3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,漢語化學名為 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽,商品名:噻唑藍。是一種黃顏色的染料。MTT法,又稱MTT比色法,是一種檢測細胞存活和生長的方法。
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MTT實驗代測
MTT全稱為3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,漢語化學名為 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽,商品名:噻唑藍。是一種黃顏色的染料。MTT法,又稱MTT比色法,是一種檢測細胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲瓚(Formazan)并沉積在細胞中,而死細胞無此功能。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細胞中的甲瓚,用酶聯免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值,可間接反映活細胞數量。在一定細胞數范圍內,MTT結晶形成的量與細胞數成正比。
MTT實驗代測
服務說明
MTT細胞實驗步驟
1、細胞種板:將對數生細胞用胰蛋白酶消化,配制成濃度為1-10×104個/ml的細胞懸液,按10000細胞/孔接種于96孔板,每孔加100μl,置于CO2(5%)培養箱中37℃下培養24h以貼壁。
2、加藥處理:繼續培養0h、12h、24h、36h分別更換為100μl細胞樣品各自對應的含有一定濃度藥物的培養基,對照組更換為含溶劑的培養基,分別記為藥物處理48h、36h、24h、12h。每個樣本濃度設三個重復。
3、MTT反應:所有孔中加入20μl 濃度為5mg/ml的、新鮮配制的MTT溶液,培養箱中孵育4小時,使MTT還原為甲瓚(此時倒置顯微鏡下可看到孔板內的細胞周圍出現絲狀紫色結晶體)。
4、DMSO溶解甲瓚:小心的吸除上清液,每孔加DMSO(二甲基亞砜)150μl,用搖床搖勻。
5、測吸光度值:使用酶標儀測定570nm光吸收值,以溶劑處理細胞為對照組,按公式計算藥物對細胞的抑制率。
抑制率=1-(實驗組-空孔)/(對照組-空孔)