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樹脂包埋(透射電鏡)實驗代測

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樹脂包埋(透射電鏡)實驗代測

樹脂包埋是將客戶處理后固定在電鏡固定液中的標本,進行修整、鋨酸后固定、脫水等過程后,采用進口812環氧樹脂作為包埋劑,將組織標本包埋在樹脂中。經過此種樹脂包埋的樣本適合進行超薄切片,透射電鏡觀察。

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樹脂包埋(透射電鏡)實驗代測

樹脂包埋是將客戶處理后固定在電鏡固定液中的標本,進行修整、鋨酸后固定、脫水等過程后,采用進口812環氧樹脂作為包埋劑,將組織標本包埋在樹脂中。經過此種樹脂包埋的樣本適合進行超薄切片,透射電鏡觀察。

 

服務說明

樹脂包埋實驗步驟:

1、取材:電鏡取材非常嚴格,取材過程中速度要快,5分鐘內要將組織取出放入固定液中;取材組織塊要小,一般要求將組織切成1立方毫米大小;取材部位要準確、取材溫度要低是在4℃條件下進行;取材工具要干凈,鋒利。如果是貼壁細胞不可用酶消化下來,先吸去培養液然后加入電鏡固定液用橡膠塊刮下細胞,離心,細胞體積保證綠豆大小即可,然后吸去上清更換固定液繼續固定。

2、固定:取材后要及時固定,組織、細胞、蛋白等固定選用2.5%中性戊二醛固定液,植物等標本則需要選用多聚甲醛和戊二醛的混合固定液。室溫固定兩小時左右后,放入4℃保存運輸(如果是植物或者肺組織,則需要進行真空抽氣固定,一般需要抽氣固定24小時左右,直至標本*沉入容器底部)。

3、鋨酸后固定:將標本從固定液中取出,用0.1mol/LPB清洗并過夜,第二天轉入1%鋨酸后固定,固定時間普通標本2h左右,植物標本812h左右。

3、脫水:鋨酸固定后的標本用用0.1mol/LPB清洗后使用梯度乙醇脫水,濃度依次是50%、70%80%、90%、95%、100%,植物標本則會在50%乙醇前面再增加一個30%乙醇梯度,脫水時間普通標本為10~15min,植物標本脫水時間為1~1.5h

4、浸透:用丙酮作為乙醇和樹脂間的過度溶劑,從純丙酮開始,中間經過丙酮和樹脂的混合劑,混合比例丙酮從高到低到純樹脂,整個浸透過程需要1~2天完成。

5、包埋:先將組織對應的標簽放包埋板中,然后加入樹脂,再將浸透好的樣本放入包埋板中,調整好包埋面,然后放入恒溫箱內熟化,熟化過程需要2~3天。熟化完成后,樣本樹脂包埋完成。

樹脂包埋(透射電鏡)實驗代測

注意事項

1、透射電鏡對取材要求嚴格,取材過程中速度要快,5分鐘內要將組織取出放入固定液中;取材組織塊要小,一般要求將組織切成1立方毫米大??;取材部位要準確、取材溫度要低,是在4℃條件下進行;取材工具要干凈,鋒利。如果是貼壁細胞不可用酶消化下來,先吸去培養液然后加入電鏡固定液用橡膠塊刮下細胞,離心,細胞體積保證綠豆大小即可,然后吸去上清更換固定液繼續固定。

2、2.5%戊二醛固定液要選擇在保質期內(固定液變黃不可用),固定液的量要足夠,至少是組織的10倍以上,如果組織固定過程中固定液明顯變黃也需要更換一次固定液;植物組織要選擇戊二醛和多聚甲醛的混合固定液;植物和肺組織由于標本本身含有大量氣體,會導致固定液無法進入標本內部達不到充分固定,所以需要真空抽氣固定。

3、樹脂包埋的樣本可以常溫保存,但是由于樹脂會吸潮變軟,所以在切片前需要提前放入60℃恒溫箱中烘烤12小時及以上,樣本烘烤時不能被密封,需要單獨放入紙盒或者金屬盒中。

4、樣本在取材、固定、運輸等過程中不可冰凍、結冰,結冰會對樣本的超微結構造成冰晶損傷。

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