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Caspase-3實(shí)驗(yàn)代測(cè)

  • 型   號(hào):Caspase-3
  • 參考價(jià):25~25

在正常狀態(tài)下, Caspase家族都以無(wú)活性的酶原(30~50kD)形式表達(dá),當(dāng)細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)Caspase可以被蛋白酶裂解,大亞基和小亞基形成活化的Caspase 。
Caspase-3實(shí)驗(yàn)代測(cè)

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Caspase-3實(shí)驗(yàn)代測(cè)

Caspase家族活性的檢測(cè)

      Caspase家族在介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的過(guò)程中起著非常重要的作用。在正常狀態(tài)下, Caspase家族都以無(wú)活性的酶原(30~50kD)形式表達(dá),當(dāng)細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)Caspase可以被蛋白酶裂解,大亞基和小亞基形成活化的Caspase 。一些Caspase活化后可以次序激活其他Caspase形成Caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng),促發(fā)細(xì)胞凋亡。在目前已知的14種Caspase中,Caspase-3、8和9與凋亡的關(guān)系為密切,在細(xì)胞凋亡中起執(zhí)行凋亡的作用。將Caspase序列特異性的多肽偶聯(lián)至發(fā)色基團(tuán),當(dāng)該底物被特定的caspase剪切后,發(fā)色基團(tuán)即游離出來(lái),可通過(guò)酶標(biāo)儀或分光光度計(jì)(λ=405nm 或400nm)測(cè)定其吸光值,考察caspase的活化程度。
Caspase家族屬于半胱氨酸蛋白酶,相當(dāng)于線蟲(chóng)中的ced一3,具有高度同源性。這些蛋白酶均有以下特點(diǎn):①總是在天冬氨酸之后切斷底物,所以命名為caspase(cysteine aspartate—specific protease)。②酶活性依賴于半胱氨酸殘基的親核性。③通常以酶原的形式存在,為由兩大、兩小亞基兩兩組成的異四聚體。大、小亞基由同一基因編碼,在受到激活后前體被切割,產(chǎn)生兩個(gè)活性亞基。這些蛋白酶是引起細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵酶,一旦信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑被激活,caspase被活化,隨后發(fā)生凋亡蛋白酶的級(jí)聯(lián)反應(yīng)。細(xì)胞內(nèi)的酶被激活,可降解細(xì)胞內(nèi)的重要蛋白質(zhì),終導(dǎo)致細(xì)胞不可逆地走向凋亡。
它們的活性位點(diǎn)均包含半胱氨酸殘基,能夠特異性的切割靶蛋白天冬氨酸殘基上的肽鍵,故名。caspase負(fù)責(zé)選擇性地切割某些蛋白質(zhì),從而造成細(xì)胞凋亡。
早發(fā)現(xiàn)人類(lèi)中與線蟲(chóng)ced一3同源的基因是ICE(interleukin一1 p—convertingenzyme白介素1 p轉(zhuǎn)換酶)基因,因該酶能將白介素一1前體切割為活性分子而得名。通過(guò)cDNA雜交和基因組數(shù)據(jù)庫(kù)查找分析,在人類(lèi)細(xì)胞中已發(fā)現(xiàn)11個(gè)ICE同源物,分為2個(gè)亞(subgroup):ICE家族和CED一3家族。前者參與炎癥反應(yīng),后者參與細(xì)胞凋亡。后者又分為兩類(lèi):一類(lèi)為執(zhí)行者(executioner,effector),如caspase一3、caspase一6、caspase一7,它們可直接降解細(xì)胞內(nèi)的結(jié)構(gòu)蛋白和功能蛋白,引起凋亡,但不能通過(guò)自催化(autocatalytic)或自剪接的方式激活;另一類(lèi)為啟動(dòng)者(initiator),如caspase一8、caspase一9,受到信號(hào)刺激能通過(guò)自剪接而激活,然后引起caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng),如caspase一8可依次激活caspase~3、caspase一6、caspase一7。啟動(dòng)蛋白(initiataor)和效應(yīng)蛋白(effector)分別在死亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的上游和下游發(fā)揮作用。

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