糖化血紅蛋白(GHb)測試盒 生化試劑
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糖化血紅蛋白(GHb)測試盒,血紅蛋白中具有酮胺鍵的糖化血紅蛋白在酸性環境中加熱,使己糖部分脫水,生成 5-羥甲基糠醛 (5-HMF)化合物,后者可與 TBA 反應呈黃色,然后進行比色定量。
糖化血紅蛋白(GHb)測試盒
(15 管/14 樣)
一、測定原理:
血紅蛋白中具有酮胺鍵的糖化血紅蛋白在酸性環境中加熱,使己糖部分脫水,生成 5-羥甲基糠醛 (5-HMF)化合物,后者可與 TBA 反應呈黃色,然后進行比色定量。
二、試劑組成(15 管/14 樣):
試劑一:液體 20mL×1 瓶,室溫保存 6 個月。
試劑二:蛋白沉淀劑 20mL×1 瓶,室溫保存 6 個月。
試劑三:顯色劑 10mL×1 瓶,室溫避光保存 3 個月。
試劑四:氰化高鐵血紅蛋白測試液 40mL×1 瓶,避光保存 3 個月。
三、操作過程:
1、紅細胞洗滌:
取 EDTA 或肝素抗凝全血 2~4mL 置于帶刻度離心管中,以 500~1000 轉/分,離心 5~10 分鐘, 棄上清留沉淀的紅細胞,然后用生理鹽水按上述方法洗滌 2~3 次。(若來不及洗滌抗凝全血可放置 48小時)
2、溶血液的制備:
①、取壓積紅細胞 1mL 加冷雙蒸水 1.5mL,用手激烈震搖數分鐘,或旋渦混勻器充分混勻 1 分鐘制得溶血液,此溶血液-20℃保存,可放置 70 天。
②、溶血液的血紅蛋白(Hb)濃度測定方法如下:
取溶血液 10ml 加試劑四 2.5mL,混勻,室溫放置 10 分鐘,用分光光度計在 540nm 處,1cm 光徑水調零測各管吸光度;將所得吸光度×0.3677 即為 Hb 的含量 g/mL 。
3、酸化:
取玻璃試管,標明“0"即空白管,“U"即測定管,在“0"管中加入雙蒸水 2mL,“U"管中加入溶血液 2mL,然后各管均加入試劑一 1mL 酸化。加試劑一要緩慢,邊滴邊搖邊加入。
4、水解:
將上述試管加橡皮塞或塑料薄膜,(用針戳一小孔再用橡皮筋扎緊,將玻璃管口封?。?。置沸水浴中或干燥箱 100℃加熱水解 1 小時。
5、顯色:
①、各管加試劑二(蛋白沉淀劑)1mL,(遇天冷時,水解液可能會凝固,可再加溫使其溶解。)加試劑二要緩慢,邊滴邊搖邊加入。加完后在旋渦混勻器上混勻,再 3000~3500 轉/分,離心 10 分鐘。
②、取上清 2mL,各加試劑三(顯色劑)0.5mL,40℃水浴保溫 30 分鐘。
③、冷卻后,雙蒸水調零、443nm、1cm 光徑,測各管的吸光度。
五、參考值:
正常時每 10 克血紅蛋白中的糖化血紅蛋白的吸光度值范圍為 13.3~23.5。
六、附注:1、本法精密度較好,平均 CV 值為 4.2%。
2、溶血液如果未能及時測定,可貯存于-20℃的條件下達 70 天,不影響結果。
3、本法操作簡便不需特殊儀器。
4、計算結果換算公式:
IFCC-HbAlc(%)=每 10 克血紅蛋白的吸光度×0.001+0.0154,
IFCC- HbAlc(mmol/mol)=13×IFCC-HbAlc(%)×100-7.4,
DCCT- HbAlc(%)=(IFCC- HbAlc(mmol/mol))÷10.929+2.15)÷100。
糖化血紅蛋白(GHb)測試盒