丙酮酸脫羧酶(PDC)-測(cè)試盒 生化試劑
- 型 號(hào):
- 參考價(jià):0~0
丙酮酸脫羧酶(PDC)-測(cè)試盒,PDC主要存在于酵母中,是乙醇發(fā)酵的關(guān)鍵酶之一,催化丙酮酸脫羧生成乙醛。
丙酮酸脫羧酶(PDC)-測(cè)試盒
(貨號(hào):A141-1-1 Pyruvate Decarboxylase Kit,PDC 分光光度法)
一、測(cè)定原理:
PDC催化丙酮酸脫羧生成乙醛,添加乙醇脫氫酶
(ADH)來進(jìn)一步催化NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+;
NADH 在340nm有吸收峰,而NAD+沒有;通過測(cè)定340nm
光吸收下降速率,來計(jì)算PDC 活性。
二、測(cè)定意義:
PDC主要存在于酵母中,是乙醇發(fā)酵的關(guān)鍵酶之一,催
化丙酮酸脫羧生成乙醛。
三、自備儀器或用品:
研缽、冰、臺(tái)式離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)、1mL石英比
色皿、可調(diào)式移液槍和蒸餾水。
四、試劑盒組成(50T/48 樣):
試劑一:液體×1 瓶,4℃保存。
試劑二:液體×1 瓶,4℃保存。
試劑三:液體×1 瓶,4℃保存。
試劑四:粉劑×1 瓶,﹣20℃保存。
試劑五:液體×1 瓶,﹣20℃保存。
混合試劑:臨用前配制,小心把試劑四和五轉(zhuǎn)移到試劑三中,
充分溶解。
試劑六:液體×1 瓶,4℃保存。
五、粗酶液提取:
1、細(xì)菌或細(xì)胞處理:收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后
棄上清;按照每200 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入400μL提取
液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率200W,工作3s,
間歇10s,工作35次),16000g 4℃離心20min,取上
清,置冰上待測(cè)。
2、組織處理:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~
10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)
進(jìn)行冰浴勻漿,16000g 4℃離心20min,取上清,置
冰上待測(cè)。
3、血清(漿)樣品:直接檢測(cè)
六、操作步驟:
注:ε:NADH 摩爾消光系數(shù),6.22×10 3L/mol/cm;
d:比色皿光徑,1cm;
V 總:反應(yīng)體系總體積,1mL=0.001 L;
V 樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積,0.1mL;
Cpr:蛋白濃度,mg/mL(需要另外測(cè)定,建議使用本
公司BCA蛋白質(zhì)含量試劑盒);
W:樣本質(zhì)量,g;
V 樣總:加入提取液體,1mL;
細(xì)胞數(shù):細(xì)胞總數(shù)量,10 4個(gè);
T:反應(yīng)時(shí)間,1 min。
丙酮酸脫羧酶(PDC)-測(cè)試盒
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