谷-胱甘肽還原酶活性系數測試盒 生化試劑
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谷-胱甘肽還原酶活性系數測試盒,取新鮮全血樣本 10μL 加入雙蒸水 990μL,漩渦混勻 1分鐘使溶血,制備成 100 倍稀釋的溶血液按前 Ian 的操作表加樣。
谷-胱甘肽還原酶活性系數測試盒
(GRAC 100T/48 樣)
一、試劑組成及配制:
試劑一:緩沖液,32mL×1 瓶,4℃保存。
試劑二:底物貯備液,0.22mL×1 瓶,-20℃避光保存。
底物稀釋液,2.2 mL×1 瓶,-20℃保存。
底物應用液的配制:臨用前按底物貯備液:底物稀釋液=1:9
的比例 10 倍稀釋,制備成底物應用液,用不完的
應用液三天內 4℃保存,三天以上-20℃保存。
試劑三:基質粉劑×2 支,-20℃避光保存。
基質稀釋液,2.5mL×2 瓶,-20℃保存。
基質應用液的配制:臨用前將 1 支基質粉劑加入到 1 瓶基質
稀釋液中充分溶解,制備成基質應用液,用不完
的應用液三天內 4℃保存,三天以上-20℃保存。
試劑四:促進劑粉劑×2 支,-20℃避光保存。
促進劑稀釋液,1.3mL×2 瓶,-20℃保存。
促進劑應用液配制:臨用前將 1 支促進劑粉劑加入到 1 瓶促
進劑稀釋液中充分溶解,制備成促進劑應用液,用
不完的應用液三天內 4℃保存,三天以上-20℃保
存。
試劑五:沉淀劑,40mL×2 瓶,4℃保存。
試劑六:顯色劑粉劑×2 支,4℃避光保存。
顯色劑稀釋液,50mL×2 瓶, 4℃避光保存。
顯色劑應用液的配制:臨用前將 1 支顯色劑粉劑加入到 1
瓶顯色劑稀釋液中充分溶解,制備成顯色劑應用
液,4℃避光保存。
四、測定原理:
谷-胱甘肽還原酶(GR)在有還原型輔酶Ⅱ存在的條件
下,可催化氧化型谷-胱甘肽(GSSG)還原為還原型谷胱甘
肽(GSH),該酶的輔基為黃素腺嘌呤二核苷酸(FAD)。因
此, 當核黃素缺乏而導致FAD不足時, 則可使此酶的活性下
降。通過測定谷-胱甘肽還原酶活性系數來評價機體核黃素的
營養狀況。
五、檢測意義:
核黃素在體內以FAD的形式與酶蛋白結合成各種黃素
蛋白, 作為電子轉移系統參與氧化還原過程。核黃素缺乏時,
產生皮膚、粘膜和眼部等一系列的癥狀。為了早期發現核黃
素缺乏, 及時采取防治措施, 有必要進行核黃素營養狀況的
評定。
核黃素缺乏時, 谷-胱甘肽活性系數迅速增高, 而補充核
黃素后就降為正常。故谷-胱甘肽還原酶活性系數
(Glutathione Reductase Activation Coefficient, GRAC)是評
定核黃素慢性缺乏時體內核黃素總水平的準確指標。應用谷
胱甘肽還原酶活性系數(GRAC)的值評價核黃素營養狀況
具有靈敏、穩定、準確、微量、能反映體內代謝利用情況等
優點。
附錄 I:全血中谷-胱甘肽還原酶活性系數的測定
一、樣本前處理:
取新鮮全血樣本 10μL 加入雙蒸水 990μL,漩渦混勻 1
分鐘使溶血,制備成 100 倍稀釋的溶血液按前 Ian 的操作表
加樣。(對光看一下是否透亮,若不透亮,有渾濁,則 4000
轉/分,離心 5 分鐘,取上清液測定即可)
附錄Ⅱ:血清中谷-胱甘肽還原酶活性系數的測定
一、樣本前處理:
取血清樣本 200μL 加入 600μl 生理鹽水,即按 1:3 進行
稀釋后按操作表加樣。
附錄Ⅲ:組織中谷-胱甘肽還原酶活性系數的測定
一、樣本前處理:
準確稱取組織重量,按重量(g):體積(mL)=1:9 的比
例,加入 9 倍體積的生理鹽水,冰水條件下制備成 10%的組
織勻漿,3500 轉/分,離心 10 分鐘,取上清液,再用生理鹽
水 5 倍稀釋后制備成 2%組織上清液按操作表加樣。
谷-胱甘肽還原酶活性系數測試盒