內源性一氧化碳(CO)-測試盒 生化試劑
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內源性一氧化碳(CO)-測試盒,根據碳氧血紅蛋白(HbCO)和還原血紅蛋白(Hb)吸收光譜的差異,選擇 HbCO 吸光度之差而 Hb 吸光度之差為零的兩個波長,應用雙波長分光光度法測定樣本在這兩個波長下的吸光度差值(△OD),再通過標準曲線求出 HbCO 百分濃度,代入公式計算出內源性一氧化碳(CO)含量。
內源性一氧化碳(CO)-測試盒
(測血清、血漿)
一、測定原理:
根據碳氧血紅蛋白(HbCO)和還原血紅蛋白(Hb)吸收
光譜的差異,選擇 HbCO 吸光度之差而 Hb 吸光度之差為
零的兩個波長,應用雙波長分光光度法測定樣本在這兩個波
長下的吸光度差值(△OD),再通過標準曲線求出 HbCO 百分
濃度,代入公式計算出內源性一氧化碳(CO)含量。
二、試劑組成及配制:(100T/50 樣)
試劑一:溶血劑,100mL×1 瓶,4℃保存。
試劑二:緩沖液,100mL×3 瓶,4℃保存。
試劑三:碳氧血紅蛋白測定粉劑×10 瓶,4℃避光密封保存。
碳氧血紅蛋白測定工作液的配制:臨用前,往每瓶測定粉劑
中加入 23mL 試劑二緩沖液,加蓋顛倒混合,使
溶解,現用現配,用多少配多少,2 小時內用完,用
黑袋注意避光。
試劑四:制作 HbCO 百分曲線用的還原粉劑×6 支,4℃避光
密封保存。
試劑五:血紅蛋白 Hb 測定濃縮液,1mL×2 支,4℃避光密封
保存。
血紅蛋白 Hb 測定應用液的配制:臨用前將濃縮液用蒸餾水 1∶
99 稀釋,即 100 倍稀釋,現用現配。配好的試劑 2~
8℃避光保存,可存放 1 個月以上。
三、操作步驟:
1、血清(漿)中血紅蛋白 Hb 測定及計算:
取 0.05mL 樣本(血清 、血漿)與 2.5mL 的血紅蛋白測
定應用液(即將試劑五的濃縮液進行 100 倍稀釋),混勻,
靜置 5 分鐘后,1cm 光徑蒸餾水調零,540nm 測定各管吸光
度值。
血紅蛋白含量的計算:
血紅蛋白含量(g/L)= Α540 ×367.7
2、 樣本前處理:
①、制備溶血液:取抗凝全血 0.01mL,加入試劑一溶血劑
1.2mL 混勻,靜置 5 分鐘,使溶血。
②、制備測定樣本:取制備好的溶血液 0.1mL,加待測血漿
0.1mL,混合后制備成測定樣本。
③、制備對照樣本:取制備好的溶血液 0.1mL,加待測雙蒸
水 0.1mL,混合后制備成對照樣本。
四、碳氧血紅蛋白(HbCO)百分濃度曲線:
【可自行制作 HbCO 百分濃度曲線,也可參照本所提供的 HbCO
百分濃度曲線】
〇 飽和碳氧血紅蛋白與飽和還原血紅蛋白的制備
1、取不吸煙健康人肝素抗凝全血 0.01mL,加入試劑一溶血液
1.2mL 混勻,靜置 5 分鐘使溶血。
2、從中取 2 份,每份 0.2mL,加入到兩支具塞試管中,再分
別加入 2.3mL 試劑二緩沖液,混勻。
3、在通風櫥內,向其中一支試管里通純一氧化碳(CO),連
續通 15 分鐘,再通入氮氣 20 分鐘,得到飽和 HbCO 溶液。
4、再向另一支試管通氧氣(O2),連續通 20 分鐘,得到飽和
HbO2溶液。
五、檢測意義:
一氧化碳(carbon monoxide,CO)是與一氧化氮(NO)
極相似的小分子氣態物質。90 年代以來的大量研究揭示,生
物體內源性CO不僅作為一種新型的神經遞質參與中樞神經系
統的信息傳遞,還具有舒張血管、抑制血管平滑肌和血管內
膜增殖、抑制血小板聚集、調節體內激素分泌、抑制細胞凋
亡等多種生物學功能,在機體多種生理及病理狀態中發揮重
要的作用。
六、計算公式:
〇 碳氧血紅蛋白百分濃度(HbCO%)的計算:
通過分別測定 568nm 與 581nm 的吸光度,計算△OD
(A568-A581)的吸光度值差。再由標準曲線,通過回歸
方程計算出碳氧血紅蛋白百分比濃度,即 HbCO%。
【注 1】如不直接制作百分濃度曲線,也可參照本所提供
的百分濃度曲線,回歸方程為:
y = 0.822x + 0.001
x 即為△OD(A568-A581)的吸光度值,y 即為碳氧血紅蛋白
百分比濃度。
HbCO%=[ 0.822×△OD(A568-A581)+0.001 ]×
【注 2】 A568 為 HbCO 吸光度之差的波長;A581為 Hb 吸
光度之差為零的波長。
〇 血清/血漿中 Hb 的測定步驟及計算公式:
取 0.05mL 樣本(血清/血漿)與 2.5mL 的血紅蛋白測定應
用液(即將試劑五的濃縮液進行 100 倍稀釋),混勻,靜置 5
分鐘后,1cm 光徑蒸餾水調零,波長 540nm 測定各管吸光度
值。
血紅蛋白含量的計算:
血紅蛋白含量(g/L)= Α540 × 73.54
內源性一氧化碳(CO)-測試盒