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內(nèi)源性一氧化碳(CO)測(cè)試盒 生化試劑

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內(nèi)源性一氧化碳(CO)測(cè)試盒,90 年代以來(lái)的大量研究揭示,生物體內(nèi)源性 CO 不僅作為一種新型的神經(jīng)遞質(zhì)參與中樞神經(jīng)系統(tǒng)的信息傳遞,還具有舒張血管、抑制血管平滑肌和血管內(nèi)膜增殖、抑制血小板聚集、調(diào)節(jié)體內(nèi)激素分泌、抑制細(xì)胞凋亡等多種生物學(xué)功能,在機(jī)體多種生理及病理狀態(tài)中發(fā)揮重要的作用。

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內(nèi)源性一氧化碳(CO)測(cè)試盒

(測(cè)全血)

一、 檢測(cè)意義:

一氧化碳(carbon monoxideCO)是與一氧化氮

NO)極相似的小分子氣態(tài)物質(zhì)。90 年代以來(lái)的大量

研究揭示,生物體內(nèi)源性 CO 不僅作為一種新型的神經(jīng)

遞質(zhì)參與中樞神經(jīng)系統(tǒng)的信息傳遞,還具有舒張血管、

抑制血管平滑肌和血管內(nèi)膜增殖、抑制血小板聚集、調(diào)

節(jié)體內(nèi)激素分泌、抑制細(xì)胞凋亡等多種生物學(xué)功能,在

機(jī)體多種生理及病理狀態(tài)中發(fā)揮重要的作用。

二、 測(cè)定原理:

根據(jù)碳氧血紅蛋白(HbCO)和還原血紅蛋白(Hb

吸收光譜的差異,選擇 HbCO 吸光度之差而 Hb

光度之差為零的兩個(gè)波長(zhǎng),應(yīng)用雙波長(zhǎng)分光光度法測(cè)定

樣本在這兩個(gè)波長(zhǎng)下的吸光度差值(OD),再通過(guò)標(biāo)

準(zhǔn)曲線求出 HbCO 百分濃度,代入公式計(jì)算出內(nèi)源性一

氧化碳(CO)含量。

三、 試劑組成及配制:(50T/48 樣)

試劑一:溶血?jiǎng)?/span>100mL×1 瓶,4℃保存。

試劑二:緩沖液,100mL×2 瓶,4℃保存。

試劑三:碳氧血紅蛋白測(cè)定粉劑×6 瓶,4℃避光密封保

存。

碳氧血紅蛋白測(cè)定工作液的配制:臨用前,往每瓶測(cè)定

粉劑中加入 23 mL 試劑二緩沖液,加蓋顛倒混

合,使溶解,現(xiàn)用現(xiàn)配,用多少配多少,

2 小時(shí)內(nèi)用完,用黑袋注意避光。

試劑四:制作 HbCO 百分曲線用的還原粉劑×6 支,4℃

避光密封保存。

試劑五:血紅蛋白 Hb 測(cè)定濃縮液,1mL×2 支,4℃

光密封保存。

血紅蛋白 Hb 測(cè)定應(yīng)用液的配制:臨用前將濃縮液用蒸

餾水 199 稀釋,即 100 倍稀釋,現(xiàn)用現(xiàn)配。

配好的試劑 28℃避光保存,可存放 1 個(gè)月以

上。

四、操作步驟:

1 全血中血紅蛋白 Hb 測(cè)定及計(jì)算:

0.01mL 樣本(全血)與 2.5mL 100 倍稀釋的試

劑五應(yīng)用液(血紅蛋白測(cè)定應(yīng)用液),混勻,靜置 5 分鐘

后,1cm 光徑蒸餾水調(diào)零,540nm 測(cè)定各管吸光度值。

血紅蛋白含量的計(jì)算:

血紅蛋白含量(g/L= Α540 ×367.7

2 樣本前處理

①、肝素抗凝全血的制備:取末梢血立即加入到肝素

抗凝管內(nèi),加蓋封口,輕輕搓動(dòng),制成肝素抗凝

全血,28℃保存。

②、溶血液的制備:取抗凝全血 10μL,加入試劑一溶

血?jiǎng)?/span> 1.2mL 混勻,靜置 5 分鐘,使溶血,待

測(cè)。(如果你的樣本量很少并很珍貴,可按樣本

試劑一溶血?jiǎng)?/span>1120 進(jìn)行稀釋并溶血)

3 全血中碳氧血紅蛋白測(cè)定

①、取經(jīng)過(guò)前處理的樣本(全血經(jīng)前處理制備的溶血

液)0.2mL,加入試劑三碳氧血紅蛋白 Hb 測(cè)定工

作液 2.3mL,混勻。

②、靜置 10 分鐘后,試劑二緩沖液調(diào)零,1cm 光徑,

分別測(cè) 568nm 581nm 的吸光度。

五、碳氧血紅蛋白(HbCO)百分濃度曲線:

【可自行制作 HbCO 百分濃度曲線,也可參照本所

提供的 HbCO 百分濃度曲線】

飽和碳氧血紅蛋白與飽和還原血紅蛋白的制備

1取不吸煙健康人肝素抗凝全血 10μL,加入試劑一溶

血液 1.2mL 混勻,靜置 5 分鐘使溶血。

2從中取 2 份,每份 0.2mL,加入到兩支具塞試管中,

再分別加入 2.3mL 試劑二緩沖液,混勻。

3在通風(fēng)櫥內(nèi),向其中一支試管里通純一氧化碳(CO),

連續(xù)通15分鐘,再通入氮?dú)?/span>20分鐘,得到飽和HbCO

溶液。

4再向另一支試管通氧氣(O2),連續(xù)通 20 分鐘,得

到飽和 HbO2 溶液。

六、計(jì)算公式:

碳氧血紅蛋白百分濃度(HbCO%)的計(jì)算:

通過(guò)分別測(cè)定568nm581nm的吸光度,計(jì)算OD

A568-A581)的吸光度值差。再由標(biāo)準(zhǔn)曲線,

通過(guò)回歸方程計(jì)算出碳氧血紅蛋白百分比濃度,即

HbCO%

【注 1如不直接制作百分濃度曲線,也可參照本

所提供的百分濃度曲線,回歸方程為:y =

0.822x + 0.001

x 即為ODA568-A581的吸光度值y 即為碳

氧血紅蛋白百分比濃度。

HbCO%=[ 0.822×ODA568-A581+0.001 ]×

【注 2 A568 HbCO 吸光度之差的波長(zhǎng);A581

Hb 吸光度之差為零的波長(zhǎng)

溶血液中 Hb 的測(cè)定步驟及計(jì)算公式:

0.01mL 全血樣本與 2.5mL 100 倍稀釋的試劑

五應(yīng)用液(血紅蛋白測(cè)定應(yīng)用液),混勻,靜置 5

分鐘后,1cm 光徑蒸餾水調(diào)零,波長(zhǎng) 540nm 測(cè)定各

管吸光度值。

血紅蛋白含量的計(jì)算:

血紅蛋白含量(g/L= Α540 ×367.7

七、計(jì)算:

1、全血中血紅蛋白 Hb 測(cè)定及計(jì)算:

0.01mL 全血樣本與 2.5mL 100 倍稀釋的試劑

五應(yīng)用液(血紅蛋白測(cè)定應(yīng)用液),混勻,靜置 5

分鐘后,1cm 光徑蒸餾水調(diào)零,540nm 測(cè)定各管吸

光度值。

血紅蛋白含量的計(jì)算:

血紅蛋白含量(g/L= Α540 ×367.7

2、碳氧血紅蛋白測(cè)定前處理:

① 肝素抗凝全血的制備:取末梢血立即加入到肝

素抗凝管內(nèi),加蓋封口,輕輕搓動(dòng),制成肝素

抗凝全血,28℃保存。

② 溶血液的制備:取抗凝全血 10μL,加入試劑一

溶血?jiǎng)?/span> 1.2mL 混勻,靜置 5 分鐘,使溶血,

待測(cè)。(如果你的樣本量很少并很珍貴,可按樣

∶試劑一溶血?jiǎng)?/span>1120 進(jìn)行稀釋并溶血)

3、全血中碳氧血紅蛋白測(cè)定

①、取經(jīng)過(guò)前處理的樣本(全血經(jīng)前處理制備的溶

血液)0.2mL,加入試劑三碳氧血紅蛋白 Hb

測(cè)定工作液 2.3mL,混勻。

②、靜置 10 分鐘后,試劑二緩沖液調(diào)零,1cm

徑,分別測(cè) 568nm 581nm 的吸光度。

內(nèi)源性一氧化碳(CO)測(cè)試盒 

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