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檸檬酸(Citric Acid,CA)試劑盒 生化試劑

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檸檬酸(Citric Acid,CA)試劑盒,是生物體內(nèi)常見的有機酸,是重要的食品風味物質(zhì)。此外,CA 是三羧酸循環(huán)第一步反應(yīng)的產(chǎn)物。

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檸檬酸(Citric Acid,CA)試劑盒

50T/48 樣)

一、測定意義

檸檬酸(CA)是生物體內(nèi)常見的有機酸,是重要的

食品風味物質(zhì)。此外,CA 是三羧酸循環(huán)第一步反應(yīng)的產(chǎn)

物。

二、測定原理

酸性條件下,檸檬酸還原 Cr 6+生成 Cr 3+ ,Cr 3+ 545nm

處有特征吸收峰;通過測定 545nm 吸光值的增加,即可

計算出樣品中檸檬酸含量。

三、自備實驗用品及儀器。

水浴鍋、低溫離心機、可見分光光度計、1 mL 玻璃

比色皿、可調(diào)式移液槍和蒸餾水。

四、試劑組成和配制

試劑一:液體×1 瓶,4°C 保存;

試劑二:液體×1 瓶,4°C 保存;

試劑三:液體×1 支,-20°C 保存;

試劑四:粉劑×1 瓶,室溫保存;臨用前加入 5mL 試劑一,

充分溶解配置;

試劑五:液體×1 瓶,4°C 避光保存;

標準品:液體×1 支,250μmol/L 檸檬酸標準液,4°C 保存。

五、樣品中檸檬酸提取

1、液體樣品中檸檬酸提取:取 0.1mL 液體加試劑一 0.9mL

充分混勻,11000g4°C 離心 10min,取上清液待測;

2、組織中檸檬酸提取:按照組織質(zhì)量(g:提取液體積

mL)為 1:5 10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,

加入 1mL 試劑一)進行冰浴勻漿,11000g4°C 離心

10min,取上清液置冰上待測;

3、線粒體中檸檬酸提取:按照組織質(zhì)量(g):提取液體

積(mL)為 15 10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,

加入 1mL 試劑一)進行冰浴勻漿;

600g

4°C 離心 5min

取上清至另一 EP 管中,11000g4°C 離心 10min,棄

上清;向沉淀中加 200μL 試劑二,與 2μL 試劑三,充

分懸浮溶解,11000g4°C 離心 10min,取上清液待測。

4、細菌、真菌中:按照細胞數(shù)量(10 4 個):試劑一體積

mL)為 500-1000:1 的比例(建議 500 萬細胞加入試

劑一 1mL),冰水浴超聲破碎細胞(功率 300W,超聲

3 秒,間隔 7 秒,總時間 3 分鐘),11000g4°C 離心

10min,取上清液待測。

八、注意事項

1、樣品處理等過程均需在冰上進行;

2、試劑四需現(xiàn)配現(xiàn)用;

3. 試劑五中含有致癌物質(zhì),實驗過程中,請佩戴手套,

避免試劑五濺到皮膚上;

4. 檸檬酸提取液不能用于蛋白含量測定,如需測定蛋白

含量,需另取組織,使用本研究所蛋白質(zhì)含量檢測試

劑盒(考馬或 BCA 法)。

 檸檬酸(Citric Acid,CA)試劑盒

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