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己糖激酶(HK)試劑盒 生化試劑

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己糖激酶(HK)試劑盒,廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,是葡萄糖分解過程中的第一個關鍵酶,催化葡萄糖轉為 6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖是糖酵解和磷酸戊糖途徑的交叉點。

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己糖激酶(HK)試劑盒

(分光光度法 50 /48 )

一、測定意義:

己糖激酶(Hexokinase, HK )(EC 2.7.1.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,是葡萄糖分解過程中的第一個關鍵酶,催化葡萄糖轉為 6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖是糖酵解和磷酸戊糖途徑的交叉點。

二、測定原理:

HK 催化葡萄糖合成 6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脫氫酶進一步催化 6-磷酸葡萄糖脫氫生成

NADPH,NADPH 340nm 有特征吸收峰。

三、自備的儀器和用品:

紫外分光光度計、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1mL 石英比色皿、研缽、冰、蒸餾水。

四、試劑的組成和配制:

提取液60mL×1 瓶,4℃保存;×

試劑一:液體 30mL×1 瓶,4℃保存;

試劑二:粉劑×1 瓶,4℃保存;臨用前加入 30mL 蒸餾水充分溶解備用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融;

試劑三:液體 5mL×1 瓶,4 度保存;

試劑四:粉劑×1 支,-20℃保存,臨用前加入 4mL 蒸餾水充分溶解備用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融;

試劑五:粉劑×1 支,-20℃保存,臨用前加入 2mL 蒸餾水充分溶解備用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融;

試劑六:粉劑×1 支,-20℃保存,臨用前加入 250μL 試劑一和 250μL 蒸餾水充分溶解備用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。

五、樣本的前處理:

1細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(10 4):提取液體積(mL)為 500-1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 20% 200W,超聲 3S,間隔 10s,重復 30 次);8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

2組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5-10 的比例(建議稱取 0.1g 組織,加入 1mL 提取液),進行冰浴勻漿。8000g4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

3、血清(漿)樣品:直接檢測。

六、測定步驟:

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預實驗

1、分光光度計預熱 30min 以上,調節波長至 340nm,蒸餾水調零。

2、將試劑一、二、三、四和五 37℃(哺乳動物)或 25℃(其他物種)預熱 10 分鐘。

注意事項:

1、如果一次性測定樣本數較多,可將試劑一、二、三、四、五和六按照比例配成混合液,預熱 10min

2、不同勻漿組織中的 HK 活力不一樣,做正式實驗之前請做 1-2 只預試,若A>0.5,則說明組織活力太高,必須用提取液稀釋成適當濃度勻漿上清液(計算公式中乘以相應稀釋倍數),或縮短反應時間至 2min,使A<0.5,以提高檢測靈敏度。

 己糖激酶(HK)試劑盒

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