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微量丙二醛(MDA)測試盒 檢測服務(wù)

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微量丙二醛(MDA)測試盒,是在原MDA 試劑盒針對一些含量較少的樣本(比如培養(yǎng)細(xì)胞及細(xì)胞上清)測試效果不是太好的的基礎(chǔ)上改進(jìn)的一種更為靈敏、簡便的測試方法。

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微量丙二醛(MDA)測試盒

(比色法)

本試劑盒是在原MDA 試劑盒針對一些含量較少的樣本

(比如培養(yǎng)細(xì)胞及細(xì)胞上清)測試效果不是太好的的基礎(chǔ)上

改進(jìn)的一種更為靈敏、簡便的測試方法。

一、測試原理:

過氧化脂質(zhì)降解產(chǎn)物中的丙二醛 MDA)可與硫代巴

比妥酸(TBA)縮合,形成紅色產(chǎn)物, 532nm 處有吸

收峰。因底物為硫代巴-比妥酸(Thibabituric Acid TBA)所

以此法稱 TBA 法。

二、測試所需儀器和試劑:

可見光分光光度計,可調(diào)到 95℃左右的恒溫水浴箱或

沸水浴鍋,離心機(jī),無水乙醇(分析純),冰醋酸(分析純)。

三、試劑盒組成與配制(50 /24 A003-2-1)

試劑一:液體 10mL×1 瓶,4℃保存。

試劑二:液體 6mL×1 瓶,用時加 170mL 雙蒸水混勻,4

冷藏。(注意不要碰到皮膚上)。

試劑三:粉劑×1 支,用時將粉劑加到 32mL 雙蒸水中,加

熱到 90℃~100℃,充分溶解后再加冰醋酸 30mL

混勻后冷卻至室溫,配好的試劑避光室溫保存。

(注:冰醋酸自備)

標(biāo)準(zhǔn)品:10nmol/mL 四乙氧基丙烷 5mL×1 瓶,4℃冷藏。

四、試劑盒組成與配制(100 /48 A003-2-2):

試劑一:液體 20mL×1 瓶,4℃保存。

試劑二:液體 12mL×1 瓶,用時每瓶加 340mL 雙蒸水混

,4℃冷藏(注意不要碰到皮膚上)。

試劑三:粉劑×1 支,用時將粉劑加到 62mL 雙蒸水中,加

熱到 90℃~100℃,充分溶解后再加冰醋酸

60mL,混勻后冷卻至室溫,配好的試劑避光室溫

保存。(注:冰醋酸自備)

標(biāo)準(zhǔn)品:10nmol/mL 四乙氧基丙烷 5mL×1 瓶,4℃冷藏。

1.png

 

水?。ɑ蛴缅侀_蓋煮沸)40 分鐘,取出后流水冷卻, 532nm

處,1cm 光徑,雙蒸水調(diào)零,測各管吸光度值 A

a* 表示所取的樣品量、標(biāo)準(zhǔn)品量、無水乙醇的量、試劑一的量,

四者均相等。例如樣品取 0.1mL 則標(biāo)準(zhǔn)品、無水乙醇、試劑

一也取 0.1mL,若樣品取 0.2mL 則標(biāo)準(zhǔn)品、無水乙醇及試劑

一也取 0.2mL。因吸光度與加樣量呈正比曲線,因而結(jié)果不

受影響。

** 對照管每個樣本都需要做。

2、參考取樣量:血清(漿)取 0.10.2mL。低密度脂蛋白懸

液取 0.10.2mL 。細(xì)胞懸液及細(xì)胞上清取

0.10.2mL

3、規(guī)范操作方法標(biāo)準(zhǔn)管參考吸光度:當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品取樣量為 0.1mL

時,則標(biāo)準(zhǔn)管吸光度減去空白管的吸光度為

0.0650.0701cm 光徑)。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品取樣量為

0.2mL 時,則標(biāo)準(zhǔn)管吸光度減去空白管的吸光

度為 0.1300.1401cm 光徑)。

4、規(guī)范操作方法及簡便操作方法中,若發(fā)現(xiàn)檢測樣本吸光度

太低,可以將水浴時間 40 分鐘延長至 80 分鐘,但您的同

一課題中 MDA 的檢測都必須延長至 80 分鐘,以免造成批

間差異。

六、簡便操作方法:(如果樣本數(shù)量很多,您可以采用簡便操作

方法。)

1、混合試劑的配制:

工作液Ⅰ的配制:試劑一:試劑二:試劑三= a*:3:1,用多少配

多少,配好后當(dāng)天測定;

工作液Ⅱ的配制:試劑一:試劑二: 50%冰醋酸= a*:3:1,用多

少配多少,配好后當(dāng)天測定。

:a*表示與樣本的取樣量相同,單位為毫升(mL)

旋渦混勻器混勻,試管口用保鮮薄膜扎緊,用針頭刺一小

孔,95℃水?。ɑ蛴缅侀_蓋煮沸)40 分鐘,取出后流水冷卻,

532nm 處,1cm 光徑,雙蒸水調(diào)零,測各管吸光度值。

a* 表示所取的樣品量、標(biāo)準(zhǔn)品量、無水乙醇的量、試劑一

的量,四者均相等。例如樣品取 0.1mL 則標(biāo)準(zhǔn)品、無水

乙醇、試劑一也取 0.1mL,若樣品取 0.2mL 則標(biāo)準(zhǔn)品、

無水乙醇及試劑一也取 0.2mL。因吸光度與加樣量呈正

比曲線,因而結(jié)果不受影響。

** 對照管每個樣本都需要做。

1以上規(guī)范操作法及簡便操作法適用于人及各種動植物

的樣本(包括血清、動植物組織及體液、細(xì)胞及細(xì)胞

培養(yǎng)液等)。

2規(guī)范操作方法及簡便操作方法中,若發(fā)現(xiàn)檢測樣本吸

光度太低,可以將水浴時間 40 分鐘延長至 80 分鐘,

但您的同一課題中 MDA 的檢測都必須延長至 80

鐘,以免造成批間差異。

七、測定意義:

機(jī)體通過酶系統(tǒng)與非酶系統(tǒng)產(chǎn)生氧自由基,后者能攻擊

生物膜中的多不飽和脂肪酸(polyunsaturated fatty acid

PUFA),引發(fā)脂質(zhì)過氧化作用,并因此形成脂質(zhì)過氧化物。

如:醛基(丙二醛 MDA)、酮基、羥基、羰基、氫過氧基或

內(nèi)過氧基,以及新的氧自由基等。脂質(zhì)過氧化作用不僅把活

性氧轉(zhuǎn)化成活性化學(xué)劑,即非自由基性的脂類分解產(chǎn)物,而

且通過鏈?zhǔn)交蜴準(zhǔn)街ф湻磻?yīng),放大活性氧的作用。因此,初

始的一個活性氧能導(dǎo)致很多脂類分解產(chǎn)物的形成,這些分解

產(chǎn)物中,一些是無害的,另一些則能引起細(xì)胞代謝及功能障

礙,甚至死亡。氧自由基不但通過生物膜中多不飽和脂肪酸

PUFA)的過氧化引起細(xì)胞損傷,而且還能通過脂氫過氧

化物的分解產(chǎn)物引起細(xì)胞損傷。因而測試 MDA 的量常常可

反映機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度,間接地反映出細(xì)胞損傷的程

度。

MDA 的測定常常與 SOD 的測定相互配合,SOD 活力的

高低間接反應(yīng)了機(jī)體清除氧自由基的能力,而 MDA 的高低

又間接反應(yīng)了機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度,通過 SOD

MDA 的結(jié)果分析有助于醫(yī)學(xué)、生物學(xué)、藥理及工農(nóng)業(yè)生

產(chǎn)的發(fā)展。

八、注意點(diǎn):

1、試管要干凈,尤其測微量樣品時更為重要。

2、配制試劑時要充分混勻。測試過程中管吸的試劑要

丟棄,加樣品或試劑時要垂直加,不要加在管壁上。95

水浴前要充分混勻。

3、水浴時間及溫度要固定。沒有水浴鍋的單位可用鋁鍋、

鋁盒、鋁盆等開蓋煮沸即可。

4、高脂樣本操作時,離心沉淀一定要充分,否則影響吸光

度,造成結(jié)果不穩(wěn)定。這種情況可增加離心轉(zhuǎn)速(3000

轉(zhuǎn)/分以上)或者延長離心時間使沉淀。

5、冬天若發(fā)現(xiàn)測試溶液呈霧狀可以輕輕放水浴箱稍稍加

溫,待溶液溶解呈透明狀態(tài)用移液器吸取放入比色杯

中,若仍然呈霧狀,則考慮為高脂血癥。

6、樣本取樣量:若您的樣量較多,取樣量可以加倍,抽提

過程中,雙蒸水、無水乙醇、氯仿均要加倍。若您的樣

本為貧血病人的血樣,則取樣量也要加倍,抽提過程中,

雙蒸水、無水乙醇、氯仿的量則不變。

7、95℃水浴時用帶蓋的試管,以免反應(yīng)液的蒸發(fā)。若

沒有帶蓋的試管可用冰箱保鮮膜蓋好,用橡皮筋扎好后

在保鮮膜上用針刺一小孔即可代替蓋子。

九、本試劑盒優(yōu)點(diǎn):

1、本試劑盒中試劑均無刺激性氣味,對操作人員無任何毒

害。

2、快速準(zhǔn)確,操作簡便,每小時可測 100 例以上樣本。

3、靈敏度高,血清或血漿樣品只需 0.1mL,或者更少。

4、再現(xiàn)性好,變異系數(shù) CV=2.0%,同一份標(biāo)本數(shù)次測試結(jié)

果相差極微。

5、呈色穩(wěn)定,呈色后半天內(nèi)測吸光度不變。

6、試劑穩(wěn)定,保質(zhì)期一年;試劑三配制后避光室溫保存至

3 個月(顏色變成咖啡色即不可使用)。

7、血清樣品放置 4℃,35 天內(nèi)測試結(jié)果不變。-70℃以下

可保存 3 個月至半年。

8、測試面廣,可測血清(漿)、各種組織勻漿,培養(yǎng)細(xì)胞等。

9、主要原料均為進(jìn)口,但價格適中。

10、不需昂貴與特殊儀器,只需恒溫水浴箱或者鋁鍋、鋁盆

開蓋煮沸,及 721722751、752 分光光度計任一型

號均可。

11、不受氣溫等外界因素的影響。是目前國內(nèi)MDA

測試方法。

 微量丙二醛(MDA)測試盒

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