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超微量 -Na +K+ Ca 2+Mg 2+ -ATP 酶測試盒 生化試劑

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超微量 -Na +K+ Ca 2+Mg 2+ -ATP 酶測試盒,ATP 酶可分解 ATP 生成 ADP 及無機磷,測定無機磷的量可判斷 ATP 酶活力的高低。

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超微量 -Na +K+ Ca 2+Mg 2+ -ATP 酶測試盒

(測組織、培養(yǎng)細(xì)胞)

一、試劑組成與配制:

111.png

 

二、樣本的前處理:

1、組織的前處理:(組織勻漿上清液的制備參考實驗方法學(xué))

準(zhǔn)確稱取組織重量,按重量(g):體積(mL)=1:9 的比例,加

9 倍體積的生理鹽水,冰水浴條件下機械勻漿,2500 轉(zhuǎn)/

分,離心 10 分鐘,取上清液(即 10%的勻漿上清液),再用

生理鹽水 10 倍稀釋成 1%,同時用考馬斯亮藍(lán)試劑測定組織

蛋白(試劑本所有售)。如果預(yù)試結(jié)果太高,再將 1%的組織

勻漿稀釋成不同濃度再進(jìn)行預(yù)試后再決定取樣濃度

2、培養(yǎng)細(xì)胞的前處理:將培養(yǎng)細(xì)胞消化,離心,棄上清,留下

層細(xì)胞,每管加 0.20.3mL 生理鹽水或勻漿介質(zhì)制備成

10 7 /cm3 細(xì)胞懸液,即 10 7 /mL,再進(jìn)行破碎。破碎細(xì)胞的方

法有三種:①、用勻漿器勻漿。②、用超聲粉碎器粉碎。③、

反復(fù)凍溶 3 (第③種方法有時會影響酶活力)。制備好的

細(xì)胞懸液不需要離心,同時用考馬斯亮蘭試劑測定組織蛋白

(試劑本所有售)。再將細(xì)胞勻漿液稀釋成不同濃度進(jìn)行預(yù)

試,根據(jù)預(yù)試結(jié)果決定取樣濃度。

[ 1]:在測試加樣前要搖勻后取樣。

[ 2]:不可用磷酸鹽緩沖液或含磷的試劑作為樣本勻漿或

稀釋樣本。

[ 3]:預(yù)試結(jié)果將吸光度值(測定管吸光度值對照

管吸光度值)控制在 0.2 左右為宜。

三、規(guī)范操作步驟:

1、酶促反應(yīng):

222.png

六、測定原理:

ATP 酶可分解 ATP 生成 ADP 及無機磷,測定無機磷的

量可判斷 ATP 酶活力的高低。

七、測定意義:

ATP 酶存在于組織細(xì)胞及細(xì)胞器的膜上,是生物膜上的

一種蛋白酶,它在物質(zhì)運送、能量轉(zhuǎn)換以及信息傳遞方面具

有重要的作用,機體在缺氧及一些疾病狀態(tài)下,此酶活力發(fā)

生一系列改變,另外有些遺傳疾病也與此酶活力有關(guān)。

超微量 -Na +K+ Ca 2+Mg 2+ -ATP 酶測試盒

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