谷-氨酰胺合成酶（GS）測(cè)定試劑盒

（比色法）

一、測(cè)定意義

谷-氨酰胺合成酶（Glutamine synthetase，GS）主要存在于植物中，是生物體內(nèi)氨同化的關(guān)鍵酶之一，催化銨

離子和谷-氨酸合成谷-氨酰胺，不僅可以防止過多的銨離子對(duì)生物的毒性，而且谷-氨酰胺也是氨的主要儲(chǔ)存和運(yùn)輸形式。

二、測(cè)定原理

GS 在 ATP 和 Mg 2+的存在下，催化銨離子和谷-氨酸合成谷-氨酰胺；谷-氨酰胺進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為γ-谷氨酰基異羥肟酸，在酸性條件下形成的絡(luò)合物在 540nm 處有吸收峰，可用分光光度計(jì)測(cè)定其吸光值來判定 GS 的活力。

三、所用儀器與耗材

可見光分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、離心機(jī)、1mL 玻璃或石英比色皿、研缽、蒸餾水等

四、試劑組成和配置（24T）

提取液：30mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：12mL×1 瓶，-20℃保存。使用時(shí) 37℃預(yù)熱 20min，充分混勻，如有沉淀，靜置 10min，取上清待用。

試劑二：12mL×1 瓶，-20℃保存。使用時(shí) 37℃預(yù)熱 20min，充分混勻，如有沉淀，靜置 10min，取上清待用。

試劑三：粉劑×2 瓶，-20℃保存。使用時(shí)每瓶粉劑加入 5mL 蒸餾水充分溶解待用。

試劑四：15mL×1 瓶，4℃保存。

五、樣本前處理

1、 組織：按照組織重量（g）：提取液體積（mL）為 1:10 的比例混合后，冰水浴勻漿，4000 轉(zhuǎn)/min 離心 10min，取上清置冰上待測(cè)。

2、 血清（漿）：直接取樣測(cè)定。

3、 細(xì)胞、細(xì)菌或組織樣品：收集細(xì)胞或細(xì)菌于離心管中，離心后棄上清，按照細(xì)胞或 細(xì)菌數(shù)量（10 4個(gè)）：提取液體積（mL）為 500：1 的比例混合，超聲波破碎細(xì)胞或細(xì)菌（條件：冰浴、功率 20%或 200W、超聲3s、間隔 10s、重復(fù) 30 次）后待測(cè)。

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